ИФА анализ крови

Диагностика – первый и важный этап медицинской помощи, от успешности которого зависит эффективность назначаемой терапии при любом заболевании. Это утверждение справедливо и для паразитарных болезней, большинство из которых не вызывают специфических симптомов, поэтому поиски причин полностью сводятся к назначаемым анализам. Из самых современных и высокоинформативных следует выделить иммуноферментный анализ. Он даёт представление не только о наличии антител к определённому виду паразитов, но выявляет количественную характеристику этих антител, которая даёт информацию о стадии заболевания или о ходе лечения.

Преимущества и недостатки

Иммуноферментный анализ крови (ИФА) на паразитов произвёл настоящую революцию в лабораторной аналитике паразитологии, на что есть целый ряд причин:

  • Высокая чувствительность метода. Даже если в образец попадёт единственный элемент организма паразита, этого будет достаточно, чтобы получить удовлетворительный результат. Другие лабораторные методы анализов не могут конкурировать с ИФА по этому показателю.
  • Специфичность метода. Безошибочность диагностики исключает неправильную идентификацию возбудителя, поскольку за реакцию отвечают специфические антитела. То есть, вид паразитов, вызвавший заболевание, при ИФА не может быть спутан даже с очень близким по внешнему виду или хромосомному набору.
  • ИФА с успехом заменяет бактериологический метод, который требовал более длительного периода до получения данных и подразумевал проведение лечения вслепую до ознакомления с результатами. Иммуноферментный метод позволяет получить данные в течение двух суток.
  • Высокий уровень технологичности сводит к минимуму ошибки, вызванные влиянием человеческого фактора, который остаётся неизменно высоким при других методах. Это гарантирует высокую точность диагностики и исключает значительные погрешности.
  • ИФА даст результаты даже на начальных стадиях заражения, когда остальные анализы ещё не выявят ни возбудителей, ни их продуктов жизнедеятельности.
  • Можно узнать, на какой стадии развития в момент забора крови находился возбудитель: циста, личинка или взрослая особь.

У метода есть и определённые недостатки:

  • Расшифровкой полученных данных должен заниматься только квалифицированный специалист.
  • В назначении на анализ должен быть безошибочно указан тип возбудителя, то есть врач должен заранее предполагать, наличие какого паразита могло вызвать начало болезни.
  • Для проведения иммуноферментного определения гельминтов необходима высокотехничная лаборатория со специализированным оборудованием и высококвалифицированным персоналом, прошедшим специальную подготовку и получившим соответствующие сертификаты о праве выполнения ИФА. Такие лаборатории встречаются далеко не в каждой больнице.
  • Высокая стоимость. Аналогичные методики стоят в разы дешевле, поэтому иммуноферментный анализ иногда недоступен по цене для пациентов из социальных групп с низкой платежеспособностью.

Иммуноферментный анализ крови на паразитов выполняют только по направлению от специалиста, в котором указано, на какой тип гельминтов или группу необходимо проверить пациента. Без направления пробу крови в лаборатории попросту не возьмут.

Принцип действия

Основной принцип заключается в образовании комплекса антигенов с антителами. Процесс зависит от двух составляющих:

  • Иммунный ответ. Он означает, что искомая часть в пробе связывается с молекулами того препарата, который добавляется по методике. Это приводит к образованию особого комплекса, не возникающего, если добавляемый препарат не будет рассчитан на имеющийся тип паразитов.
  • Ферментативная реакция. После образования комплекса лаборант судит о результате по появлению определённой окраски. После этого результаты можно увидеть, оценить и измерить.

Такой подход обеспечивает очень высокую результативность – около 99,97%.

Биоматериал для анализа

Для проведения иммуноферментного анализа на паразитов у пациента берут пробу венозной крови в объёме 3-5 см3. Дальше в лаборатории все форменные элементы (эритроциты, гемоглобин и пр.) отделяют, а для теста оставляют только сыворотку желтоватого цвета, в которой содержатся необходимые антигены.

Биоматериал отбирают из локтевой вены. Чтобы избежать ложных результатов, кровь сдаётся натощак. За две недели до анализа для достоверности результатов нужно отказаться от любых антибиотиков и алкоголя. Также просят перед исследованием не пить газированную воду.

В тех случаях, когда исследование проводят для новорожденных детей, биоматериалом может быть плацента или пуповинная кровь.

Как проводится

Кровь помещают в стерильную лабораторную пробирку. К имеющемуся образцу добавляют лабораторные заготовки с антителами к тем паразитам, которые пытаются определить у пациента. На образование комплекса уходит несколько суток.

В сложных случаях, когда для начала лечения нужны срочные данные, применяют лабораторные методы катализа процесса для ускорения реакции. Цена таких методик ещё выше, но они немного уступают классическим в точности. Зато эти экспресс-методики позволяют получить ответ уже через 2-3 часа после отбора биологического материала.

Расшифровка полученных данных

Заниматься интерпретацией результатов ИФА может только специалист, направивший пациента на тестирование. Иногда для того, чтобы получить реальную картину, необходим сравнительный анализ свежих данных с теми, которые были получены раньше.

Иммуноферментная методика предоставляет данные о трёх типах иммуноглобулинов (антител):

  • IgM. Появляются в крови на четвёртые сутки после заражения и наращивают свою концентрацию, потом она идёт на спад, и после шести недель эти вещества уже могут не присутствовать в пробе. Их наличие показывает, что процесс протекает остро, и паразиты активно размножаются в кишечном тракте или других органах и системах органов.
  • IgG. Начинают вырабатываться после третьей-четвёртой недели заражения и могут сохраняться на протяжении нескольких месяцев или лет. Такая картина говорит о том, что заболевание приняло хроническую форму и протекает скрыто. При рецидивах уровни IgМ и IgG параллельно увеличиваются.
  • IgA. Этот тип иммуноглобулинов начинает появляться после двух недель присутствия паразитов в организме, а исчезает после одного-двух месяцев. Значительное повышение уровня может указывать на начало рецидива.

Адекватно оценить все эти показатели, их взаимодействие и реальную картину может далеко не каждый врач, а только высококвалифицированный специалист. Поэтому категория врача в этом отношении играет не меньшую роль, чем уровень лаборатории, где проводят исследования.

Результаты пациенту предоставляют на стандартном бланке лаборатории в виде таблицы, в которой перечислены все антитела, а напротив них указаны плюсы (в случае обнаружения) или минусы (если элементы не выявлены). Также указываются данные в количественном выражении, свидетельствующие о концентрации найденных веществ в условных единицах.

Стоимость

Иммуноферментный анализ входит в категорию дорогостоящих, но его цена отличается в зависимости от региона и уровня лаборатории.

Стоимость варьирует в зависимости оттого, на какой вид паразита направлено исследование. В сети медицинских лабораторий «Гемотест» цена на ИФА стартует от 520 рублей (на токсокароз) и доходит до 1120 рублей (дифференциальная диагностика гельминтозов).

В независимой лаборатории «Invitro», которая имеет представительства во многих крупных и средних городах России, цена на иммуноферментное определение паразитов начинается от 650 рублей (на лямблиоз) и достигает 1000 рублей (на токсоплазмоз).

Современная лабораторная диагностика шагнула далеко вперёд, и теперь ни одно исследование не проходит без высокочувствительных тестов. Ранее необходимо было провести много диагностических манипуляций, чтобы установить причину заболевания, подтвердить предполагаемый диагноз. Сейчас выполняется ИФА анализ, позволяющий исключить множество ненужных процедур.

Что такое ИФА

Под аббревиатурой ИФА (расшифровывается – иммуноферментный анализ) понимается биохимическая методика лабораторной диагностики, позволяющая выявлять специфические антитела белковой природы (вирусы, фрагменты бактериальных микроорганизмов, ферменты, другие компоненты, присутствующие в биологических жидкостях) путём инициации реакции, базирующейся на сцеплении «антиген-антитело».

Чтобы разобраться детально, что собой представляет ИФА, необходимо дать определение основным понятиям.

Антиген – это белковая молекула, составляющая инфекционного агента, попадающего в организм извне. Кстати, кровь другого человека, не совпадающая по группе с «хозяйской», тоже воспринимается как «вражеская» и содержит антигены. В результате попадания чужеродных элементов активируется иммунная реакция, которая направлена на защиту всего организма. Иммунный ответ сопровождается выработкой антител.

Антитела — это специальные иммуноглобулины, которые вырабатываются в ответ на появление антигена. Вместе они формируют иммунный комплекс, который и является мишенью для клеток иммунитета человека.

Виды иммуноглобулинов

Все антитела делятся на несколько видов, исходя из того, на какой из стадий иммунного ответа они образуются.

Первыми в игру вступают иммуноглобулины класса М, которые обозначаются аббревиатурой IgM. Данные соединения вырабатываются на стадии проникновения в организм инфекции. Как правило, максимальные их значения в крови диагностируются в первый-третий дни заболевания.

Как только инфекция распространилась по тканям и органам, иммунная система начинает вырабатывать антитела класса G. Они отвечают за уничтожение антигенов, которые попали в организм, вплоть до полной победы над ними. Данные соединения продолжают находиться в теле человека длительное время, циркулируя по крови и обеспечивая стойкий иммунитет к тому или иному заболеванию. На этом факторе и основывается вакцинация. Вакцинные препараты содержат образцы антигенов – ослабленные и убитые микробы или вирусы, их части, искусственно синтезированные патогенные белки. При выполнении прививки в теле человека вырабатывается большое количество иммуноглобулинов IgG, которые при встрече с реальным возбудителем болезни смогут уничтожить его в короткий срок или существенно снизить нанесённый ним вред.

Иммуноглобулины класса А содержатся в слизистых оболочках и предотвращают дальнейшее проникновение инфекции, а антитела IgE защищают от инфекционных болезней, вызванных паразитами.

Для лабораторных исследований значимыми являются иммуноглобулины классов М, G и А. Оценка их количества позволяет сделать вывод о стадии инфекционного процесса и интенсивности его протекания. Кроме того, эти показатели информативны для подтверждения факта перенесённого заболевания – например, краснухи, ветряной оспы или гепатита А.

Принцип ИФА и сходство с ПЦР

Помимо ИФА, есть много лабораторных исследований, показывающих наличие заболевания. Иммуноферментный анализ стал современной заменой бактериальным посевам, проведение и интерпретация результатов которых занимали 3-5 дней. В течение этого времени врачам приходилось действовать вслепую. ИФА позволило медицине перейти на новый уровень.

Лаборатория делает комплексное исследование крови на всевозможные антигены и антитела, которые предполагает врач, всего за несколько часов. Иммуноферментный анализ крови и расшифровка результатов занимают некоторое время, но не более суток. Для этого в лабораторных условиях воспроизводится реакция «антиген-антитело» с применением имеющихся реактивов. Это позволяет определить, есть ли в исследуемом образце биологического материала соответствующее соединение. ИФА показывает, в какой стадии развития находится инфекционное заболевание, но не может рассказать о возбудителе. Такие данные может дать только полимеразная цепная реакция.

Суть этого метода – в выявлении непосредственного возбудителя. ИФА и ПЦР имеют некоторые сходства, но со стороны профессиональной лабораторной диагностики представляют абсолютно разные методы анализа. Таким образом, ИФА может показывать продукты жизнедеятельности возбудителей, а ПЦР – самого «виновника» болезни. Данная информация может значить только одно – комплексное использование лабораторных методов позволяет быстрее идентифицировать заболевание и начать лечение пациента.

Показания к сдаче анализа

Показаний к иммуноферментному анализу довольно много. Невозможно охватить весь список целиком. К показаниям относятся практически все вирусные и бактериальные инфекции, возбудители которых содержат вещества белковой природы. К наиболее распространённым из них можно отнести:

  • цитомегаловирус;
  • гепатиты любой этиологии (А, В, С и Д);
  • вирус Эпштейна-Барра;
  • корь;
  • краснуха;
  • полиомиелит;
  • токсоплазмоз;
  • вирус герпеса;
  • паразитарные инфекции (гельминтоз, аскаридоз, лямблиоз);
  • дизентерия;
  • сальмонеллёз;
  • амебиаз;
  • большинство аутоиммунных заболеваний (системная красная волчанка, болезнь Мошковича, миастения Грависа, синдром Шегрена и другие);
  • заболевания, передаваемые половым путём.

Кроме этого, ИФА позволяет выявить некоторые онкомаркеры и определить содержание ряда гормонов в плазме крови.

Как делают анализ

Основным материалом для иммуноферментного анализа является сыворотка крови. У пациента берут кровь из вены, потом её подвергают центрифугированию, чтобы избавиться от лишних кровяных телец. Вместо венозной крови можно использовать околоплодные воды, мазки со слизистых оболочек и спинномозговую жидкость.

Особенности подготовки

Для того чтобы сохранить точность результата, анализ сдаётся натощак, а за две недели до его выполнения отменяют приём противовирусных и противомикробных препаратов. Такие меры принимаются, чтобы исключить влияние внешних факторов на результаты исследования.

Порядок взятия пробы

Условия получения биологического материала крайне важны для точности будущего результата. Довольно многое зависит от техники забора крови и стерильности инструментов. Как правило, взятие кровяной сыворотки осуществляют так, чтобы проникновение иглы в окружающие вену ткани произошло в один прокол. Кровь должна стекать по стенке пробирки равномерно, чтобы входящие в её состав эритроциты не разрушились в процессе анализа.

Когда проводят исследование крови, и когда будет результат

Для того чтобы иммуноферментный анализ дал точный ответ, исследование проводят натощак утром. Временной промежуток, в который можно получить результат, составляет от одного до трёх дней. Срок получения заключения может быть сокращён до нескольких часов при участии врача, который сможет сразу же расшифровать показатели. Сущность анализа сводится к получению определённых антител или антигенов.

Иммуноферментный анализ проводится по такой схеме. Сначала получают образец биологической жидкости (чаще всего – сыворотка крови). Для исследования используют пластиковые планшеты с лунками, в которые помещены очищенные антигены интересующего возбудителя, если целью анализа является определение антител, или антитела, если оценивают антигены. Полученный у пациента биоматериал вносится в заполненные лунки, затем наблюдают за реакцией. Если в крови обследуемого есть искомые соединения, образуется иммунный комплекс «антиген-антитело», если нет – ничего не произойдёт. Для визуализации химического процесса в лунку вводят красящее вещество, которое реагирует с объединённой молекулой, и это фиксируется путём инструментальной оценки оптической плотности.

Расшифровка результатов теста

Расшифровкой результатов занимается только обученный медицинский персонал. Результатом будет однозначный ответ — найдено ли искомое вещество в биологической жидкости или нет.

Анализируемые показатели

Обычно при оценке результатов анализируют следующие показатели.

  • Антитела класса М. Наличие данного белкового соединения говорит о том, что в организме протекает острый инфекционный процесс. Антиген может указывать на хроническую инфекцию.
  • Иммуноглобулины класса А (IgA). Присутствие таких веществ говорит о скрытых инфекциях, которые не могут быть диагностированы по IgM.
  • Одновременное присутствие в анализах иммуноглобулинов классов А и М. Если в биологической жидкости обнаружены два типа веществ, это может говорить об обострении инфекции.
  • Иммуноглобулины класса G. Такие белковые соединения появляются в организме при переходе активной фазы в хроническую, либо диагностируют выздоровление и появление иммунитета к антигену.

IgG и IgM обычно вместе не встречаются.

Варианты результатов анализа

Результат, как правило, представлен данными, занесёнными в таблицу, в которой перечисляются все виды антител и полученный результат. Он либо отрицательный, либо положительный. В случаях неточности может указываться количество антител, которое говорит о слабоположительной или слабоотрицательной реакции.

Кроме этого, в результатах анализов показано значение индекса авидности антител (характеристика прочности связи специфических антител с соответствующими антигенами). Этот показатель выражается в процентах и показывает временной промежуток, который прошёл от начала заражения. Чем показатель выше, тем больше времени прошло.

Если ИФА отрицательный, в большинстве случаев это говорит о том, что предполагаемое антитело не найдено, но не значит, что человек абсолютно здоров. Анализы могут не показать антитела к предполагаемому возбудителю, но не исключают наличие других.

Почему результат может быть недостоверным

Иммуноферментный анализ – один из самых высокоточных и очень редко даёт погрешности. Тем не менее, они случаются.

Недостоверность ИФА может означать следующее:

  • нарушены правила забора биологической жидкости;
  • кровь была взята в вечернее время;
  • перед забором крови пациент плотно поел;
  • за несколько недель до исследования был начат терапевтический курс лечения антибиотиками либо противовирусными препаратами.

Преимущества и недостатки исследования

Как и любое биохимическое исследование, метод ИФА имеет преимущества и недостатки. К наиболее значимым достоинствам можно отнести:

  • иммуноферментный анализ – один из самых высокочувствительных и специфических методов диагностики заболеваний;
  • возможность распознавания антител в биологическом материале даже при самых маленьких его количествах в исследуемом образце;
  • однозначность результатов;
  • возможность постановки диагноза уже в первые дни протекания болезни;
  • реактивы, которые используются в иммуноферментном анализе, создаются в новейших лабораториях, что гарантирует точность результата.

Тем не менее, ИФА имеет и недостатки.

  • Иммуноферментный анализ подразумевает теорию о предполагаемом возбудителе, к которому вырабатываются антитела. Если врач не знает, от чего необходимо лечить пациента, то действует практически вслепую. Диагноз должен быть хотя бы в виде теории, которую необходимо подтвердить.

ИФА-тест используется в диагностике большинства известных заболеваний, однако не может определить вид возбудителя. Он всего лишь указывает на присутствие антител, которые говорят о наличии чужеродного белка в теле человека.

  • ИФА крови имеет довольно внушительную стоимость.

Стоимость диагностики

Анализ крови методом ИФА – на данное время самый высокоточный среди аналогичных исследований. Однако стоимость такой экспертизы составляет от 1000 рублей за один показатель. Полноценное исследование обычно стоит от 5000 до 10 000 рублей.

Анализ на коронавирус

Иммуноферментный анализ (или сокращенно ИФА) – это лабораторное исследование, которое помогает поставить точный диагноз, выявить скрытые болезни, определить предрасположенность к тем или иным заболеваниям, а также контролировать эффективность назначенной терапии. Во время исследования в сыворотке крови пациента выявляются антигены, характерные для конкретных возбудителей, и антитела к ним.

В чем суть

Для того чтобы понять принцип проведения ИФА, необходимо вспомнить, как работает иммунная система организма, что такое «антиген» и «антитела», и какие функции они выполняют.

Антиген – это молекула, которая несет определенную информацию о клетке. Если в организм попадает чужеродный антиген, антитела (или иммуноглобулины (Ig) в ответ на появление в организме чужеродного микроорганизма связываются с ним и опознают, свой это или чужой. При сигнале «чужой», антитела начинают уничтожать потенциально опасный объект. Такое взаимодействие «антиген-антитело» называется иммунным комплексом. На нем и основан метод ИФА.

Показания

Анализ широко применяется для диагностики различного рода заболеваний. И что особенно ценно, это исследование достаточно точно диагностирует заболевания, которые протекают в организме скрыто, без симптомов.

С его помощью можно выявить:

ИФА позволяет выявить даже маркеры заболеваний сердца. Кроме того, его назначают и для оценки эффективности проводимого курса лечения, а также перед некоторыми видами хирургических вмешательств.

Подготовка

Кровь для исследования берется из вены натощак, желательно, в утренние часы.

Накануне следует воздержаться от алкоголя, сладких напитков, кофе и обильного ужина. Кроме того, на результаты показателей может повлиять прием определенных лекарственных средств, поэтому необходима консультация с лечащим врачом.

За 4 часа до проведения необходимо исключить курение.

Иммуноферментный анализ крови в ОН КЛИНИК

Международный медицинский центр ОН КЛИНИК оснащен собственной лабораторией, имеющей международный сертификат контроля качества. Здесь опытные и квалифицированные специалисты проводят различного рода анализы (более 1000 наименований).

Среди преимуществ данного метода можно выделить то, что он уже на самых ранних этапах развития болезни выявляет ее. Чувствительность теста составляет 90%. Исследование точно показывает динамику инфекционного процесса, что позволяет специалисту отслеживать эффективность терапии. Весь процесс проведения полностью автоматизирован, что исключает влияние так называемого «человеческого фактора».

Дополнительно к тому, высокоточное оборудование позволяет получить достоверные результаты исследования в минимально короткий промежуток времени.

Расшифровать результаты Вы сможете в тот же день с врачом. На основе их врач выберет тактику лечения, которая подходит именно Вам.

ОН КЛИНИК: За более чем 26 лет работы нас выбрали миллионы людей. Присоединяйтесь!

Врачи

Заведующая КДЛ, врач клинической лабораторной диагностики 1-й категории

Запись на прием Запишитесь на прием по телефону 8(495)223-22-22 или заполнив форму online

Администратор свяжется с Вами для подтверждения записи. ММЦ «ОН КЛИНИК» гарантирует полную конфиденциальность Вашего обращения.

В связи с развитием клеточных технологий, молекулярной биологии, генетики, физики, химии и ряда других высокотехнологичных дисциплин в повседневную практику внедряются новые высокоточные и высокотехнологичные методы. Данные междисциплинарные тенденции затрагивают и область медицинских знаний, и смежные области биологических, биохимических проблем. За последние десять лет получил широкое распространение и внедрение в массовую практику метод клинической лабораторной диагностики под названием иммуноферментный анализ.
Вообще технологии иммунологических ферментативных и радиологических реакций широко использовались в типировании клеток, культур клеток, различных тканей с начала 80-х годов XX столетия. Однако методы эти были очень трудоемкими, не унифицированными, не стандартизированными, что исключало их использование в лечебно-диагностических целях в массовом порядке. Такими методами пользовались лишь узкие, наукоемкие и высокоспециализированные лаборатории.
Однако с развитием техники, микротехники, производства различных биополимерных материалов стало возможным производить готовые наборы иммуноферментной диагностики, которыми смогут пользоваться лаборатории лечебно-профилактических учреждений широкого профиля. ИФА широко используется для диагностики всевозможных инфекций (хламидиоз, сифилис, цитомегаловирус, токсоплазмоз, герпес и т.д.), как острых, так и хронических, а также скрытых форм, которые протекают без клинических симптомов.Также этот метод применяют для контроля над хроническими заболеваниями. Давайте постараемся разобраться, что это за метод, и какие принципы лежат в его основе?

Компоненты иммуноферментного анализа – иммунная реакция и ферментативная реакция

Иммуноферментный анализ, как видно из названия, состоит из двух разных компонентов – иммунной реакции и ферментативной реакции. Иммунная реакция производит связывание биологических молекул, элементов клетки или микроорганизма, которые собственно и пытаются обнаружить, а ферментная реакция позволяет увидеть и измерить результат иммунологической реакции. То есть иммунная реакция – это часть комплексной методики, которая собственно обнаруживает искомый микроб. А ферментная реакция – это та часть комплексной методики, которая позволяет перевести результат иммунной реакции в форму, видимую глазом, и доступную для измерения рутинными химическими методиками. Исходя из такой структуры метода иммуноферментного анализа, разберем обе его части по отдельности.

Иммунная реакция, что это? Что такое антитело, антиген?

Что такое иммунная реакция? Что такое антиген?
В первую очередь разберем, что такое иммунные реакции. Иммунные реакции – это специфические реакции связывания антигена с антителом с образованием иммунного комплекса. Что это значит? На поверхности каждой клетки любого организма имеются особые структуры, которые называются антигены. Антигены в целом – это молекулы, которые несут информацию о клетке (подобно информации на бейдже у человека, где указываются основные данные этого человека).
Индивидуальные и видовые антигены – что это? Зачем нужны эти антигены?
Имеются антигены индивидуальные, то есть присущие только данному конкретному организму. Эти индивидуальные антигены разные у всех людей, есть похожие друг на друга, но все равно отличающиеся. Двух одинаковых копий индивидуальных антигенов в природе не существует!
Второй основной тип антигенов – это видовые антигены, то есть присущие какому-либо конкретному виду живых существ. Например, у человека присутствует свой видовой антиген, общий для всех людей, у мышей имеется свой мышиный видовой антиген и т.д. На поверхности каждой клетки обязательно присутствуют видовой и индивидуальный антиген.
Видовой антиген используют клетки иммунной системы для опознавания «свой – чужой».
Как происходит узнавание антигена?
Иммунная клетка связывается с подозрительной клеткой и проводит опознание именно по индивидуальному антигену. В памяти иммунной клетки «записано» как выглядит «свой антиген». Таким образом, если антиген подозрительной клетки совпадает с описанием «свой антиген», значит, эта клетка собственного организма и опасности не представляет. Тогда иммунная клетка «отвязывается» и уходит. А если антиген не совпадает с описанием «свой», тогда иммунная клетка идентифицирует эту клетку как «чужой», а значит потенциально опасный для всего организма. В этом случае иммунная клетка не «отвязывается», а начинает уничтожать опасный объект. Точность такого иммунологического узнавания поражает воображение – 99,97%. Ошибок практически не бывает!
Что такое антитело, иммунный комплекс?
А что представляет собой антитело?
Антитело – это особая молекула, расположенная на поверхности иммунной клетки. Именно антитело и связывается с антигенами подозрительной клетки. Далее антитело передает информацию внутрь клетки, где происходит опознавание, и получает обратный сигнал двух видов «свой» или «чужой». При сигнале «свой» антитело разрушает связь с антигеном и отпускает клетку.
Что такое иммунный комплекс?
При сигнале «чужой» ситуация разворачивается иначе. Антитело не разрывает связь с антигеном, а наоборот, посылая специфические сигналы, вызывает «подкрепление». Биологически это означает, что другие антитела, находящиеся в другой части клетки, начинают перемещаться к участку, откуда идет сигнал опасности, и также образуют связь между собой и пойманным антигеном. В конце концов, антиген оказывается, окружен со всех сторон и прочно привязан.Такой комплекс антиген + антитело называется иммунный комплекс. С этого момента начинается утилизация антигена. Но сейчас подробности процесса нейтрализации антигена нас не интересуют.
Виды антител (IgA, IgM, IgG, IgD, IgE)
Антитела – это белковые структуры, которые, соответственно, имеют химическое название, которое и используется как синоним слова антитела. Итак, антитела = иммуноглобулины.
Существуют 5 типов иммуноглобулинов (Ig), которые связываются с разными видами антигенов в разных местах человеческого организма (например, на коже, на слизистых, в крови и т. д.). То есть антитела имеют разделение труда. Эти иммуноглобулины называются буквами латинского алфавита – A, M, G, D, E и обозначаются следующим образом – IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.
В диагностике используют только один вид антител, который наиболее специфичен в отношении определяемого микроба. То есть связывание данного вида антител с определяемым антигеном происходит всегда. Чаще всего применяются IgG и IgM.
Именно этот принцип иммунной реакции (уникальная точность и специфичность узнавания определяемого биологического объекта) лежит в основе иммуноферментного анализа.В силу высокой точности антител в узнавании антигенов, точность всего метода иммуноферментного анализа оказывается также высочайшей.

Ферментативная реакция

Какая реакция – ферментативная? Что такое сродство, субстрат и продукт реакции?
Перейдем к рассмотрению ферментативной реакции в работе метода иммуноферментного анализа.
Что такое ферментативная реакция?
Ферментативная реакция – это химическая реакция, при которой одно вещество под действием фермента превращается в другое. Вещество, на которое действует фермент,называется субстратом. А вещество, которое получается в результате воздействия фермента, называется продуктом реакции. Причем особенность ферментативной реакции такова, что определенный фермент действует только на определенный субстрат. Такое свойство фермента узнавать «свой» субстрат называется сродством.
Таким образом, каждый фермент проводит только одну, специфичную для него реакцию. Ферментов в биологическом мире известно великое множество, равно как и ферментативных реакций. В иммуноферментной диагностике используется лишь несколько ферментативных реакций – не более 10.При этом выбирали такие ферментативные реакции, продуктом которых являются окрашенные вещества. Почему же продукты ферментативной реакции должны быть окрашенными? Потому что для вычисления концентрации вещества по окрашенному раствору существует простой химический метод – колориметрия.

Метод колориметрии – суть и принцип

Колориметрия применяет измерение плотности окраски раствора, а по плотности окраски вычисляют концентрацию вещества.При этом специальный прибор – колориметр измеряет плотность окраски раствора. В колориметрии возможны два варианта зависимости плотности окраски от концентрации вещества – это прямо пропорциональная зависимость или обратно пропорциональная зависимость. При прямо пропорциональной зависимости, чем выше концентрация вещества, тем интенсивнее плотность окраски раствора. При обратно пропорциональной зависимости, чем выше концентрация вещества, тем ниже плотность окраски раствора. Технически это происходит так: берется несколько растворов с известной концентрацией вещества, измеряется плотность этих растворов, строится график зависимости концентрации от плотности окраски (калибровочный график).
Далее измеряют плотность окраски раствора, концентрацию которого выясняют, и по калибровочному графику находят значение концентрации, соответствующее уровню измеренной плотности окраски раствора.В современных автоматических колориметрах только один раз проводят калибровку, далее аппарат сам строит калибровочную кривую, которая остается в памяти прибора, и измерение происходит автоматически.
В иммуноферментном анализе чаще всего применяются следующие ферменты: пероксидаза, щелочная фосфатаза, авидин.
Как же совмещаются иммунологическая и ферментативная реакция в иммуноферментном анализе? Сейчас мы перейдем к рассмотрению собственно иммуноферментного анализа. Какие этапы он включает и что происходит при протекании этих реакций? Иммуноферментный анализ бывает прямой и непрямой.

Прямой иммуноферментный анализ – этапы проведения

В прямом иммуноферментном анализе используют антитела к выявляемому антигену, соединенные со специфической меткой. Эта специфическая метка и есть субстрат ферментативной реакции.
Прикрепление антигенов к поверхности лунки и соединение антигена с антителом
Как проходит прямой иммуноферментный анализ? Берется биологический материал (кровь, соскобы со слизистых, мазки) и помещается в специальные лунки. Биологический материал оставляют в лунках на 15-30 минут, чтобы антигены могли приклеиться к поверхности лунок. Далее в эти лунки добавляют антитела к выявляемому антигену. Это значит, что выявляя антигены, например, сифилиса, добавляются антитела против антигенов сифилиса. Эти антитела получают промышленным способом, а лаборатории покупают уже готовые наборы.Данную смесь исследуемого материала и антител оставляют на некоторое время (от 30 минут до 4-5 часов), чтобы антитела смогли найти и связаться со «своим» антигеном.Чем больше в биологической пробе антигенов, тем больше антител свяжется с ними.
Удаление «лишних» антител
Как было указано, антитела к тому же связаны со специфической меткой.Поскольку антитела добавляются в избытке, то не все они свяжутся с антигенами, а если антигена вообще нет в пробе, то, соответственно, ни одно антитело не свяжется с искомым антигеном. Для того чтобы убрать «лишние» антитела, содержимое из лунок просто выливают. В результате этого все «лишние» антитела убираются, а остаются те, которые связались с антигенами, поскольку антигены «приклеены» к поверхности лунок. Лунки несколько раз ополаскивают специальным раствором, который позволяет вымыть все «лишние» антитела.
Ферментативная реакция – образование окрашенного соединения
Далее начинается второй этап – ферментативная реакция. В промытые лунки добавляют раствор с ферментом и оставляют на 30-60 минут. Данный фермент имеет сродство к веществу (специфической метке), с которым связаны антитела. Фермент проводит реакцию, в результате которой эта специфическая метка (субстрат) превращается в окрашенное вещество (продукт). Затем методом колориметрии находят концентрацию этого окрашенного вещества. Поскольку данная специфическая метка связана с антителами, значит, концентрация окрашенного продукта реакции равна концентрации антител. А концентрация антител равна концентрации антигенов. Таким образом, в результате проведенного анализа мы получаем ответ, какова концентрация выявляемого микроба или гормона.
Именно так проходит прямой иммуноферментный анализ. Однако сегодня чаще используют непрямой иммуноферментный анализ, поскольку чувствительность и точность непрямого выше, чем прямого. Итак, перейдем к непрямому иммуноферментному анализу.

Непрямой иммуноферментный анализ – этапы проведения

В непрямом иммуноферментном анализе два этапа. При проведении первого этапа используют немеченые антитела к выявляемым антигенам, а во втором этапе применяют меченые антитела к первым немеченым антителам. То есть получается не прямое связывание антитела с антигеном, а двойной контроль: связывание антител с антигеном, после чего связывание вторых антител с комплексом антитело + антиген. Как правило, антитела для первого этапа – мышиные, а для второго – козьи.
Фиксация антигенов на поверхности лунки и связывание антигена с немеченым антителом
Так же как и для прямого иммуноферментного анализа производится забор биологического материала – кровь, соскобы, мазки. Исследуемый биологический материал вносят в лунки и оставляют на 15-30 минут для приклеивания антигенов к поверхности лунок. Затем в лунки вносят немеченые антитела к антигенам и оставляют на промежуток времени (1-5 часов), чтобы антитела связались со «своими» антигенами и образовали иммунный комплекс (первый этап). После чего удаляют «лишние», не связавшиеся антитела, путем выливания содержимого лунок. Производят промывку специальным раствором для полного удаления всех не связавшихся антител.
Связывание меченого антитела с комплексом антиген + немеченое антитело
После чего берут вторые антитела – меченые, добавляют в лунки и опять оставляют на некоторое время – 15-30 минут (второй этап). За это время меченые антитела связываются с первыми – не мечеными и образуют комплекс – антитело + антитело + антиген. Однако и меченые, и не меченые антитела вносятся в лунки в избытке. Поэтому нужно опять удалить «лишние», уже меченые антитела, которые не связались с немечеными антителами. Для этого повторяют процедуру выливания содержимого лунок и промывки специальным раствором.
Ферментативная реакция – образование окрашенного соединения
После чего вносят фермент, осуществляющий реакцию превращения «метки» в окрашенное вещество. Окраска развивается в течение 5-30 минут. Затем проводят колориметрию и вычисляют концентрацию окрашенного вещества. Поскольку концентрация окрашенного вещества равна концентрации меченых антител, а концентрация меченых равна концентрации немеченых антител, которая, в свою очередь равна концентрации антигена. Таким образом, получаем концентрацию выявляемого антигена.
Такой двойной контроль в виде использования двух видов антител позволил повысить чувствительность и специфичность метода иммуноферментного анализа. Несмотря на удлинение времени проведения анализа и включение дополнительных этапов, эти потери компенсируются точностью результата. Именно поэтому в настоящее время подавляющее большинство методик иммуноферментного анализа – это непрямой иммуноферментный анализ.

Какие заболевания выявляют методом иммуноферментной диагностики?

Перейдем к рассмотрению того, какие заболевания и какие биологически активные вещества выявляются методом иммуноферментного анализа. Вещества, выявляемые методом иммуноферментного анализа, представлены в таблице.

Гормоны и маркеры заболеваний щитовидной железы Тиреопероксидаза (ТПО)
Тиреоглобулин (ТГ)
Тиреотропный гормон (ТТГ)
Тироксин (Т4)
Трийодтиронин (Т3)
Свободный тироксин (Т4)
Свободный трийодтиронин (Т3)
Диагностика репродуктивной функции Лютеинизирующий гормон (ЛГ)
Фолликулостимулирующий гормон (ФСГ)
Хорионический гонадотропин (ХГ)
Пролактин
Прогестерон
Эстрадиол
Тестостерон
Кортизол
Стероид связывающий глобулин (ССГ)
Альфафетопротеин (АФП)
Онкомаркеры Хорионический гонадотропин (ХГ)
Простатспецифический антиген (ПСА)
СА – 125
СА – 19.9
CYFRA – 21-1
М – 12 (СА – 15.3)
MUC – 1 (M – 22)
MUC1 (M – 20)
Альвеомуцин
К – цепь
L – цепь
Фактор некроза опухолей (ФНОα)
γ – интерферон
Раково-эмбриональный антиген (РЭА)
Диагностика инфекционных заболеваний Токсоплазма (IgG, IgM)
Краснуха (IgG, IgM)
Цитомегаловирус (IgG, IgM)
Герпес (IgG, IgM)
Туберкулез (IgG, IgM)
Корь (IgG, IgM)
Гепатит Д, Е, А (ВГД, ВГЕ, ВГА)
Гепатит С (ат ВГС, ВГСсore)
Гепатит В (НВs, НВе НВсore)
Уреаплазма (IgG, IgM)
Микоплазма (IgG, IgM)
Хламидия (IgG, IgM)
Микоплазма (IgG)
Сифилис (IgG)
Аспергиллёз (IgG)
Лямблии (IgG)
Helicobacter Pylori (IgG)
Псевдотуберкулез (IgG, IgM)
Кандида (IgG)
Герпес (IgG, IgM)
Эпштейн-Барр (IgG, IgM)
Цитомегаловирус (IgG, IgM)
Диагностика аутоиммунных заболеваний и определение иммунного статуса IgE – общий
С-реактивный белок (СРБ)
Глиадин (IgG, IgA)
IgG4
Общий IgG
IgG2
Общий IgA
Секреторный IgA
Общий IgD
Общий IgМ
Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК)
Маркеры заболеваний сердца Тропонин I

В таблице приведен далеко не полный перечень анализов (только наиболее распространенные), выполняемых с помощью иммуноферментного анализа. Привести же весь список не представляется возможным, поскольку он будет очень большим и постоянно пополняющимся. Помимо лабораторной диагностики метод иммуноферментного анализа широко используется в научных исследованиях.
Наседкина А.К.

Информация об исследовании

Гельминтозы – группа болезней вызываемых паразитическими червями – гельминтами (глистами). Гельминты представляют собой многоклеточные животные, организмы паразитического образа жизни. Они обитают внутри другого организма и питаются за счёт пищи и тканей хозяина. Локализация гельминтов отличается большим разнообразием, они могут паразитировать во всех органах и тканях человека. Наиболее частым местом локализации считается желудочно-кишечный тракт. Лёгкие являются местом временной локализации личинок при токсокарозе. В центральной нервной системе паразитирует эхинококк, также поражая печень и лёгкие, описторхис (возбудитель описторхоза) живёт в желчных ходах печени и протоках поджелудочной железы, трихинелла (возбудитель трихинеллеза) — в мышечной ткани.

У человека зарегистрировано паразитирование свыше 250 видов гельминтов. С током крови они могут попасть в любой уголок организма и обосноваться там. Для гельминтозов характерно сравнительно медленное развитие болезни, хроническое течение, нередко с длительной компенсацией. Основными факторами передачи гельминтов являются: фекалии людей, почва, содержащая яйца и личинки, любые продукты питания и вода, загрязнённые яйцами гельминтов. Конечными факторами передачи биогельминтов являются мясо крупного рогатого скота и свиней (трихинеллёз), многие виды пресноводных рыб, крабов и раков (описторхоз). При попадании возбудителя в организм человека у него начинаются вырабатываться специфические антитела для защиты и связывания возбудителя. С целью диагностики и подтверждения диагноза гельминтоза используют выявление специфических антител с помощью серологических реакций, учитывая длительность заболевания рекомендуется сдавать антитела класса G, повышение титра в 3-4 раза свидетельствует об активной инфекции (подробнее смотри токсокароз, описторхоз, трихинеллёз, эхинококкоз).

IgG вырабатываются через несколько недель после заражения и служат достоверным диагностическим признаком инфицирования.

Заболевание преобладает в регионах, в которых одним из основных продуктов в рационе человека является рыба семейства карповых — основной дополнительный хозяин червей. В случае легкой формы заболевания около 80% инфицированных не замечают никакой симптоматики, единственным проявлением может быть эозинофилия (повышение уровня эозинофилов в крови). Если в фекалиях больного содержатся от 10 тысяч и более яиц описторхов, то инфекция протекает тяжело. В таких случаях заболевание сопровождается болью в животе, отсутствием аппетита, повышением температуры, усталостью, пожелтением кожных покровов и белков глаз. Дальнейшее прогрессирование процесса приводит к отекам, увеличению желчного пузыря, поражению печени. Описторхоз ассоциируется с раком желчных протоков.